Эмбриология

Классификация ооцитов

Строение ооцита

 

Оценка качества яйцеклетки

Качество яйцеклеток важная составляющая успеха программы ЭКО.

Морфология (внешний вид) яйцеклетки – это один из способов, с помощью которого мы можем оценивать ее качество.

Яйцеклетка крупнее сперматозоида в 80 000 раз. Это связано с тем, что именно ооцит передает весь запас питательных веществ и энергии для последующего развития эмбриона.

Яйцеклетка окружена оболочкой, называемой zona pellucida, которая защищает яйцеклетку, действует как контейнер для эмбриона в процессе его развития до этапа имплантации.
Далее через зону проходит перивителлиновое пространство. Это пространство между zona pellucida и самим ооцитом.

Внутри ооцита находится цитоплазма, содержащая множество крошечных клеточных органов, называемых органеллами, необходимых для жизнедеятельности яйцеклетки.

Полярное тельце находится снаружи ооцита в положении «12 часов», и это указывает на то, что ооцит зрелый (готов к оплодотворению).

Ядро яйцеклетки содержит генетический материал (хромосомы и ДНК).

Оценить качество ооцитов эмбриологи могут по внешнему виду цитоплазмы, состоянию вителлинового слоя и полярного тельца.
О том, что яйцеклетка имеет хороший потенциал, говорят следующие признаки:

  • гомогенная цитоплазма однородного цвета;
  • отсутствие гранулярности цитоплазмы.

Признаки снижения качества ооцитов:

  • наличие вакуолей (мешочков, заполненных жидкостью в цитоплазме);
  • темная окраска клетки;
  • наличие включений;
  • деформация или неоднородность.
  • жировые отложения внутри цитоплазмы.
  • полная дегенирация (Deg)

Такие отклонения чаще встречаются в старшем репродуктивном возрасте, хотя причинами могут быть не правильное питание, вредные привычки, курение даже в прошлом, эндометриоз. Аномалии ооцитов связаны с более низким оплодотворением и качеством эмбрионов.

Что такое зрелость яйцеклетки?

Не все ооциты, полученные в программе ЭКО, будут зрелыми. Незрелая яйцеклетка не может принимать сперматозоид для оплодотворения.

В созревании ооцита участвуют два компонента:

  • Ядерный компонент – включает генетический материал (хромосомы/ДНК).
  • Цитоплазматический компонент – включает окружающую жидкость, называемую цитоплазмой.

Оба эти компонента должны созреть для оплодотворения и правильного развития эмбриона.

Ядерный компонент ооцита созревает после введения триггера овуляции. Триггер дает команду хромосомам на продолжение мейоза (хромосомы ооцита разъединяются для подготовки к объединению с хромосомами сперматозоида). Цитоплазма созревает по мере того, как ДНК ооцита производит и хранит особые факторы в цитоплазматической жидкости.

Когда Вы слышите, что ооцит зрелый, имеется в виду, что яйцеклетка имеет полярное тельце. Незрелый ооцит не имеет полярного тельца. Присутствие полярного тельца говорит нам о том, что хромосомы разделились (одна половина в яйцеклетке, другая половина в полярном теле). В ядре зрелой яйцеклетки должно 23 хромосомы, так ооцит готов обьединится с 23 хромосомами сперматозоида и сформировать кариотип здорового человека – 46 хромосом.

Яйцеклетки, не достигшие зрелости, могут иметь две формы: яйцеклетки в метафазе мейоза I (М1) и герминальный везикул (GV).

MII
MII
MI
GV

 

Развитие эмбрионов

День 0
День 0
зрелый ооцит
День 1
День 1
эмбрион
День 2
День 2
стадия дробления
День 3
День 3
8 клеток
День 4
День 4
стадия морулы
День 5
День 5
стадия бластоцисты

Строение бластоцисты

Оценка эмбрионов на ранних стадиях

Очень важным является выбор эмбриона для переноса в полость матки. После оплодотворения эмбриолог внимательно наблюдает за развитием эмбрионов, при этом оценивает развитие каждого из них индивидуально. Основными характеристиками являются наличие оплодотворения, темп развития и качество эмбрионов.

Прежде всего, эмбриолог смотрит на количество клеток.

В норме на 2 день развития эмбрион состоит из 2-5 клеток, на 3 день – из 6-8, а на 4 сутки количество клеток сложно сосчитать, потому что начинается их слияние и эмбрион на этом этапе принято называть морулой.

При описании эмбриона 2-3 дня развития к числу, указывающему количество бластомеров, добавляется и буквенное – отражающее качество и форму (морфологию) самих бластомеров, и наличие или отсутствие фрагментации (отделения от клеток безъядерных нежизнеспособных фрагментов цитоплазмы).

  • А – безъядерные фрагменты отсутствуют, бластомеры (клетки эмбриона) ровные, одинакового размера, имеют одно ядро, гомогенную цитоплазму;
  • В – количество безъядерных фрагментов цитоплазмы менее или равно 25%;
  • С – число фрагментов без ядер находится в пределах от 25 до 50%, есть нарушения в размерах и форме бластомеров, имеются включения в цитоплазме;
  • D – более 50% безъядерных фрагментов. Данное состояние называется тотальной фрагментацией. Такие эмбрионы не используют для переноса в полость матки (за исключением той ситуации, когда нет эмбрионов другого качества, и пациент настаивает на переносе). Нужно сказать, что даже в таких случаях может наступить нормальная беременность, только такая вероятность будет во много раз ниже, чем при переносе эмбрионов качества А или В.

Сегодня, когда наука не стоит на месте и ученые всех стран делятся своим опытом и проблемами, предлагаются всё новые идеи классификации эмбрионов. Но одно в них остается неизменным – это цифровое и буквенное обозначение количества бластомеров и фрагментации на ранних стадиях развития эмбриона, а также размер полости и качество клеток бластоцисты.

Классификация бластоцист

К пятым суткам начинается процесс кавитации (у эмбриона образуется полость, клетки делятся на две группы – трофобласт и внутреннюю клеточную массу (ВКМ), в результате на 5-6 сутки развития формируется бластоциста, которая состоит из 156-200 клеток. После разрыва оболочки (хетчинга), эмбрион готовится к имплантации к полости матки.

Классификация для бластоцист более сложная, чем для эмбрионов более ранних стадий, и состоит в оценке количества и качества клеток в разных частях бластоцисты, размеров полости эмбриона. Такая система оценки эмбрионов имеет корреляцию между качеством переносимых эмбрионов и частотой наступления беременности.

Для классификации бластоцист используют шкалу Гарднера. Данная шкала состоит из одной цифры и двух заглавных букв.
Цифра описывает размер полости бластоцисты, первая буква – качество внутренней клеточной массы, вторая буква – трофобласта (внешней клеточной массы):

  1. Размер бластоцисты, объем ее полости:
    • Полость занимает менее 50% бластоцисты.
    • Полость занимает 50% бластоцисты.
    • Полость занимает более 75% бластоцисты.
    • Бластоциста, полость которой в 2 раза превышает внутриннюю клеточную массу.
    • Бластоциста, в которой началось раскрытие оболочки (произошел хэтчинг)
    • Бластоциста, полностью освобожденная от оболочки, готовая к имплантации.
  2. Характеристика клеток, из которых будет развиваться плод (внутренняя клеточная масса):
    • A. Клеток много, границы между клетками не различимы.
    • B. Клеточные формы различимы, отмечается наличие некоторых незначительных дефектов в них (зернистость, и т.д.)
    • C. Дефекты в клетках значительные, имеются признаки апоптоза (гибели клеток).
    • D. Дегенерация клеточного состава.
  3. Характеристика клеток внешней клеточной массы (трофэктодермы), которые формируют будущую плаценту:
    • A. Клеток много, они расположены в одном слое, без дефектов.
    • B. Клеточная масса снижена незначительно.
    • C. Клеток мало, отмечаются дефекты, включения.
    • D. Дегенеративные процессы.

Качество эмбрионов можно оценить под микроскопом

Оценивание основано на трех факторах:

1
Размер эмбриона
(от 1 до 6)
2
Качество внутриклеточной
массы (ICM)
3
Качество
трофэктодермы

 

Качество внутриклеточной массы (ICM): оценка – от А (хорошее) до С (плохое)

ВКМ – А
хорошее качество
ВКМ – В
удовлетворительное качество
ВКМ – С
плохое качество

Качество трофектодермы (ТЕ): оценка от А (хорошее) до С (плохое)

ТЕ– А
хорошее качество
ТЕ– В
удовлетворительное качество
ТЕ– С
плохое качество

Лазерный хетчинг

Важным фактором наступления беременности является имплантация эмбриона, его прикрепление к полости матки.

Чтобы это произошло эмбриону необходимо выйти из своей блестящей оболочки.

Блестящая оболочка яйцеклетки и в будущем эмбриона выполняет две важные функции: предотвращает проникновение более одного сперматозоида в яйцеклетку при оплодотворении и удерживает клетки эмбриона в процессе дробления.

Естественный процесс вылупливания (хэтчинг) происходит на 5-6 сутки развития эмбриона – на стадии бластоцисты. Если этот процесс не происходит вовремя готовность принимать и вынашивать беременность (окно имплантации), время которое длится всего 24 часа, закрывается и организм женщины готовится к обновлению эндометрия (менструации).

Вспомогательный хэтчинг (от англ assisted hatching) – надсечение блестящей оболочки с целью выхода бластоцисты для имплантации к стенке матки.

Показания для проведения хэтчинга:

  • Не типично утолщенная оболочка, либо не правильная ее форма; Возраст женщины старше 35 лет;
  • Необходимость проведения преимплантационного генетического тестирования (PGT);
  • Эмбрионы после криохранения либо полученные при оплодотворении размороженных ооцитов;
  • В прошлом не удачные попытки ЭКО с отсутствием имплантации при хорошем качестве перенесенных эмбрионов и эндометрия.

В нашем медицинском центре для проведения вспомогательного хэтчинга мы применяем эффективную и полностью безопасную лазерную установку последнего поколения. Это позволяет эффективно помочь эмбриону и значимо увеличить вероятность наступления беременности.

Как проводится биопсия эмбриона?

Преимплантационное развитие эмбриона продолжается около 7 дней от момента оплодотворения ооцита сперматозоидом до его имплантации в полость матки.

Это очень важный период развития и единственный, который может быть вне организма матери, in vitro.

За 7 дней эмбрион развивается от 1 клетки до примерно 156, происходит дифференциация клеток на внутреннюю клеточную массу (ВКМ), из которой в дальнейшем развивается плод, и трофобласт (клетки для развития будущей плаценты). Эмбрион на этой стадии выглядит, как пузырек диаметром 0,2-0,3 мм и называется бластоцистой.

На 5-6 сутки развития эмбриона, до переноса в полость матки, мы имеем возможность взять порядка 5 клеток трофобласта. Такая процедура называется биопсией трофобласта, или биопсией бластоцисты. Клетки, полученные при биопсии каждой бластоцисты, помещаются в специальные промаркированные пробирки и отправляются в генетическую лабораторию.

Для эмбриона биопсия абсолютно безопасна и не вредит его развитию. До получения результатов PGT эмбрионы замораживают (витрифицируют).

Здесь вы можете увидеть видео проведения биопсии бластоцисты. Процедура выполняется под инвертированным микроскопом с увеличением 200 х, при помощи стеклянных микроинструментов и лазера.

Биопсия проводится для преимплантационного генетического тестирования (PGT) для определения хромосомного набора эмбриона PGT-A или для исключения носительства моногенных заболеваний PGT-M, структурных перестроек PGT-SR, что позволяет перенести генетически здоровый эмбрион и увеличивает шанс на наступление беременности.

Мозаицизм

Преимплантационное генетическое тестирование PGT-A эмбрионов позволило определять изменения в наборе хромосом. С внедрением этого метода стало понятно, что наряду с хромосомно здоровыми (эуплоидными) эмбрионами и анэуплотдными, то есть с неправильным хромосрмным набором, есть еще и так называемые мозаичные.
Эмбрионы с хромосомным мозаицизмом содержат две или более линии клеток с различным количеством хромосом (например, некоторые клетки являются эуплоидными, а другие – анэуплоидными).

Частота формирования мозаичных эмбрионов составляет около 18-20% на стадии бластоцисты и возникает с одинаковой частотой независимо от возраста.

Эмбрионы, которые являются полностью анеуплоидными, возникают из-за ошибок в наборе хромосом в яйцеклетке или сперматозоиде, которые переносятся в каждую клетку эмбриона. У мозаичных эмбрионов ошибка возникает после оплодотворения, и только переносится далее на клетки, уже происходящие от этой клетки.

Возможно, мозаичность является результатом быстрого деления клеток и расслабления «контрольных точек», характерных для раннего развития эмбриона, и что это переходная фаза во время развития.

Безусловно, когда в результате PGT-A есть здоровые эмбрионы, мы рассматривает их как приоритетные для эмбриотрансфера. Однако, встречаются ситуации, когда эуплоидных эмбрионов нет. Тогда после оценки степени мозаицизма мы можем перенести мозаичный эмбрион.

Наши специалисты

Лялюк Василий Васильевич

Заведующий отделением эмбриологии

Медицинский стаж: 9 лет
Стоимость приема: 650 грн
Повторный прием: 650 грн

Цены

Наименование Стоимость, грн. 
ICSI ( до 10 яйцеклеток) 7 700
Культивирование эмбрионов 6 500
Вспомогательный хетчинг 3 500
Трофектодермальная биопсия 3 370
Заморозка (витрификация) эмбрионов с учетом стоимости 1 криотека 4 180
Дополнительный криотек 855
Криохранение эмбрионов 1 месяц 335
Криохранение эмбрионов 3 месяца 855
Криохранение эмбрионов 6 месяцев 1 508
Криохранение эмбрионов 12 месяцев 2 620
Спермограмма 420

Статьи об эмбриологии

Почему перенос эмбриона лучше делать именно на 5-й день развития?

Сегодня Василий Васильевич Лялюк, эмбриолог медицинского центра Reprolife, расскажет о плюсах и минусах переноса эмбриона на всех этапах его развития.

Что влияет на качество ооцитов?

При сложности зачатия малыша женщин часто интересует вопрос, что влияет на качество яйцеклеток? Как повысить свои шансы на зачатие? Действительно, качество половых клеток - самый важный фактор для успешной беременности. Рассказывает Романова Ольга Олеговна, главный врач клиники.

Влияние размера фолликула на качество яйцеклетки

В этой статье мы обсудим, что такое фолликулы яичников, как они измеряются, почему они имеют решающее значение для лечения методами вспомогательной репродуктологии (ВРТ) и как они влияют на успешную беременность. Рассказывает Романова Ольга Олеговна, главный врач клиники.