Ембріологія

Класифікація ооцитів

Будова ооцита

Оцінка якості яйцеклітини

Якість яйцеклітин важлива складова успіху програми ЕКЗ

Морфологія (зовнішній вигляд) яйцеклітини – це один із способів, за допомогою якого ми можемо оцінювати її якість.

Яйцеклітина більша за сперматозоїд у 80 000 разів. Це пов’язано з тим, що саме ооцит передає весь запас поживних речовин та енергії для подальшого розвитку ембріона.

Яйцеклітина вкрита оболонкою, яка називається zona pellucida, вона захищає яйцеклітину і функціонує як контейнер для ембріона в процесі його розвитку до етапу імплантації. Далі через зону проходить перивітеліновий простір. Це простір між zona pellucida і самим ооцитом.

Всередині ооцита знаходиться цитоплазма, яка містить безліч крихітних клітинних органів, які називаються органелами, вони необхідні для життєдіяльності яйцеклітин.

Полярне тільце знаходиться зовні ооцита в положені «12 годин», це вказує на те, що ооцит зрілий та готовий до запліднення.

Ядро яйцеклітини вміщує генетичний матеріал (хромосоми та ДНК).

Визначити якість ооцитів ембріологи можуть за зовнішнім виглядом цитоплазми, станом вітелінового шару та полярного тільця. Про те, що яйцеклітина має хороший потенціал, вказують такі ознаки:

  • гомогенна цитоплазма однорідного кольору;
  • відсутність грануляції цитоплазми.

Ознаки зниження якості ооцитів:

  • наявність вакуолей (мішечків в цитоплазмі, які заповнені рідиною);
  • темне забарвлення клітини;
  • наявність включень;
  • деформація чи неоднорідність.
  • жирові відкладення всередині цитоплазми.
  • повна дегенерація (Deg)

Такі відхилення частіше зустрічаються в старшому репродуктивному віці, хоча причинами можуть бути неправильне харчування, паління (навіть у минулому), ендометріоз. Аномалії ооцитів пов’язані з більш низьким заплідненням та якістю ембріонів.

Що таке зрілість яйцеклітин?

Не всі ооцити, отримані в прогамі ЕКЗ будуть зрілими. Незріла яйцеклітина не може приймати сперматозоїд для запліднення.

В дозріванні ооцита беруть участь два компонента:

  • Ядерний компонент – включає генетичний матеріал (хромосоми/ДНК).
  • Цитоплазматичний компонент – включає оточуючу рідину, яка називається цитоплазмою.

Обидва компоненти мають дозріти для заплідення і правильного розвитку ембріона.

Ядерний компонент ооцита дозріває після введення тригера овуляції. Тригер дає команду хромосомам на продовження мейозу (хромосоми ооцита роз’єднуються для підготовки до об’єднання з хромосомами сперматозоїда). Цитоплазма дозріває по мірі того, як ДНК ооцита продукує та зберігає особливі фактори в цитоплазматичній рідині.

Коли Ви чуєте, що ооцит зрілий, це означає, що яйцеклітина має полярне тільце. Незрілий ооцит не має полярного тільця. Присутність полярного тільця свідчить про те, що хромосоми розділилися (одна половина в яйцеклітині, інша половина в полярному тільці). В ядрі зрілої яйцеклітини має бути 23 хромосоми, так ооцит готовий об’єднатися з 23 хромосомами сперматозоїда і сформувати каріотип здорової людини – 46 хромосом.

Яйцеклітини, які не досягли зрілості, можуть бути двох форм: яйцеклітини в метафазі мейозу І (МІ) та гермінальний везикул (GV).

MII
MII
MI
GV

 

Розвиток ембріонів

День 0
День 0
зрілий ооцит
День 1
День 1
ембріон
День 2
День 2
стадія дроблення
День 3
День 3
8 клітин
День 4
День 4
Стадія морули
День 5
День 5
стадія бластоцисти

Будова бластоцисти

Оцінка ембріона на ранніх стадіях

Дуже важливим є вибір ембріона для переносу в порожнину матки. Після запліднення ембріолог уважно спостерігає за розвитком ембріонів, при цьому оцінює розвиток кожного з них індивідуально. Основними характеристиками є наявність запліднення, темп розвитку і якість ембріонів.

Перш за все, ембріолог дивиться на кількість клітин.

В нормі на 2-ий день розвитку ембріон складається з 2-5 клітин, на 3 день – з 6-8, а на 4 добу кількісь клітин складно порахувати, тому що починається їхнє злиття і ембріон на цьому етапі прийнято називати морулою.

При описі ембріона 2-3 дня розвитку до числа, яке вказує кількість бластомерів, додається і літера, яке відображає якість та форму (морфологію) самих бластомерів, і наявність або відсутність фрагментації (відділення від клітин без’ядерних нежиттєздатних фрагментів цитоплазми).

  • А – без’ядерні фрагменти відсутні, бластомери (клітини ембріона) рівні, однакового розміру, мають одне ядро, гомогенну цитоплазму;
  • В – кількість без’ядерних фрагментів цитоплазми менше чи дорівнює 25%;
  • С – чило фрагментів без ядер знаходиться в межах від 25 до 50 %, є порушення в розмірах і формі бластомерів, в цитоплазмі є включення;
  • D – більше 50% без’ядерних фрагментів. Данний стан називається тотальною фрагментацією. Такі ембріони не використовують для переносу в порожнину матки (за виключенням тієї ситуації, коли немає ембріонів іншої якості, і пацієнт наполягає на переносі). Потрібно зазначити, що навіть в таких випадках може наступити нормальна вагітність, проте така вірогідність буде в рази нижчою, ніж при переносі ембріонів якості A чи В.

Сьогодні, коли наука не стоїть на місці і вчені всіх країн діляться своїм досвідом та проблемами, пропонуються нові ідеї класифікації ембріонів. Проте одне в них залишається незмінним – це цифрове і буквенне позначення кількості бластомерів та фрагментації на ранніх термінах розвитку ембріона, а також розмір порожнини та якість клітин бластоцисти.

Класифікація бластоцист

До п’ятої доби починається процес кавітації (у ембріона утворюється порожнина , клітини діляться на 2 групи – трофобласт і внутрішню клітинну масу (ВКМ), в результаті на 5-6 добу розвитку формується бластоциста, яка складається з 156-200 клітин. Після розриву оболонки (хетчінгу), ембріон готується до імплантації в порожнину матки.

Класифікація для бластоцист складніша, ніж для ембріонів більш ранніх стадій і полягає в оцінці кількості та якості клітин в різних частинах бластоцисти, розмірів порожнини ембріона. Така сиситема оцінки ембріонів має кореляцію між якістю ембріонів, що переносяться та частотою настання вагітності.

Для класифікації бластоцист використовують шкалу Гарднера. Данна шкала складається з однієї цифри та двох великих літер. Цифра описує розмір порожнини бластоцисти, перша літера – якість внутрішньоклітинної маси, друга літера – трофобласта (зовнішньої клітинної маси):

  1. Розмір бластоцисти, об’єм її порожнини:
    • Порожнина займає менше 50% бластоцисти.
    • Порожнина займає 50% бластоцисти.
    • Порожнина займає більше 75% бластоцисти.
    • Бластоциста, порожнина якої в 2 рази перевищує внутрішньоклітинну масу.
    • Бластоциста, в якій розпочалося розкриття оболонки (відбувся хетчінг)
    • Бластоциста, повністю звільнена від оболонки, готова до імплантації.
  2. Характеристика клітин, з яких буде розвиватися плід (внутрішньоклітинна маса):
    • A. Клітин багато, кордони між ними не розрізняються.
    • B. Клітинні форми розрізняються, відмічається наявність деяких незначиних дефектів (зернистість і тому подібне)
    • C. Дефекти в клітинах значні, є ознаки апоптозу (загибелі клітин).
    • D. Дегенерація клітинного складу.
  3. Характеристика клітин зовнішньої клітинної маси (трофектодерми), які формують майбутню плаценту:
    • A. Клітин багато, вони розташовані в одному шарі, без дефектів.
    • B. Клітинна маса знижена незначно.
    • C. Клітин мало, відзначаються дефекти, включення.
    • D. Дегенеративні процеси.

Якість ембріонів можна оцінити під мікроскопом

Оцінювання засноване на 3-х факторах:

1
Розмір ембріона
(від 1 до 6)
2
Якість внутрішньоклітинної маси (ICM)
3
Якість трофектодерми

 

Якість внутрішньоклітинної маси (ICM): оцінка – від А (хороша) до С (погана)

ВКМ – А
хороша якість
ВКМ – В
Задовільна якість
ВКМ – С
Погана якість

Якість трофектодерми (ТЕ):
оцінка від А (хороша) до С (погана)

ТЕ– А
хороша якість
ТЕ– В
задовільна якість
ТЕ– С
погана якісь

Лазерний хетчинг

Важливий фактор настання вагітності  – це імплантація ембріона, його прикріплення до порожнини матки.

Щоб це сталося ембріону потрібно вийти зі своєї блискучої оболонки.

Блискуча оболонка яйцеклітини і в майбутньому ембріона виконує дві важливі функції: попереджує проникнення більше ніж одного сперматозоїда в яйцеклітину при заплідненні і утримує клітини ембріона в процесі дроблення.

Природній процес вилуплювання (хетчінгу) відбувається на 5-6 добу розвитку ембріона – на стадії бластоцисти. Якщо цей процес не вібувається вчасно, то готовність приймати і виношувати вагітність (вікно імплантації), час який триває всього 24 години, зачиняється і організм жінки готується до оновлення ендометрію (менструації).

Допоміжний хетчінг (від англ. assisted hatching) – надсічення блискучої оболонки з ціллю виходу бластоцисти для імплантації до стінки матки.

Показання для проведення допоміжного хетчінгу:

  • нетипово потовщена оболонка або її неправильна форма;
  • вік жінки старше 35 років;
  • необхідність проведення преімплантаційного генетичного тестування (PGT)
  • ембріони після кріозберігання чи отримані при заплідненні розморожених ооцитів;
  • в минулому невдалі спроби ЕКЗ з відсутністю імплантації при хорошій якості перенесених ембріонів та ендометрію.

В нашому медичному центрі для проведення допоміжного хетчінгу ми застосовуємо ефективну і повністю безпечну лазерну установку останнього покоління. Це дозволяє ефективно допомогти ембріону і значно збільшити вірогідність настання вагітності.

Як проводиться біопсія ембріона?

Преімплантаційний розвиток ембріону триває близько 7 днів від моменту запліднення ооцита сперматозоїдом до його імплантації в порожнину матки.

Це дуже важливий період розвитку і єдиний, який може бути поза організмом матері, in vitro.

За 7 днів ембріон розвивається від 1 клітини до приблизно 156, відбувається диференціація клітин на внутрішню клітинну масу (ВКМ), з якої в подальшому розвивається плід, і трофобласт (клітини для розвитку майбутньої плаценти). Ембріон на цій стадії виглядає, як міхурець діаметром 0,2-0,3 мм і називається бластоцисти.

На 5-6 добу розвитку ембріона, до перенесення в порожнину матки, ми маємо можливість взяти близько 5 клітин трофобласта. Така процедура називається біопсією трофобласта, або біопсією бластоцисти. Клітини, отримані при біопсії кожної бластоцисти, поміщаються в спеціальні промарковані пробірки і відправляються в генетичну лабораторію.

Для ембріона біопсія абсолютно безпечна і не шкодить його розвитку. До отримання результатів PGT ембріони заморожують (вітрифікують).

Тут ви можете побачити відео проведення біопсії бластоцисти. Процедура виконується під інвертованим мікроскопом зі збільшенням 200 х, за допомогою скляних мікроінструментів і лазера.

Біопсія проводиться для преімплантаційного генетичного тестування  (PGT) для визначення хромосомного набору ембріона PGT-A або для виключення носійства моногенних захворювань PGT-M, структурних перебудов PGT-SR, що дозволяє перенести генетично здоровий ембріон і збільшує шанс на настання вагітності.

Мозаїцизм

Преімплантаційне генетичне тестування PGT-A ембріонів дозволило визначати зміни в наборі хромосом. З впровадженням цього методу стало зрозуміло, що поряд з хромосомно здоровими (еуплоіднимі) ембріонами і анеуплоїдними, тобто з неправильним хромосомним набором, є ще й так звані мозаїчні.
Ембріони з хромосомним мозаїцизмом містять дві або більше лінії клітин з різною кількістю хромосом (наприклад, деякі клітини є еуплоідними, а інші – анеуплоїдними).

Частота формування мозаїчних ембріонів становить близько 18-20% на стадії бластоцисти і виникає з однаковою частотою незалежно від віку.

Ембріони, які є повністю анеуплоїдними, виникають через помилки в наборі хромосом в яйцеклітині або сперматозоїді, які переносяться в кожну клітину ембріона. У мозаїчних ембріонів помилка виникає після запліднення, і тільки переноситься далі на клітини, вже відбуваються від цієї клітини.

Можливо, мозаїчність є результатом швидкого ділення клітин і розслаблення «контрольних точок», характерних для раннього розвитку ембріона, і що це перехідна фаза під час розвитку.

Безумовно, коли в результаті PGT-A є здорові ембріони, ми розглядає їх як пріоритетні для ембріотрансфер. Однак, зустрічаються ситуації, коли еуплоідних ембріонів немає. Тоді після оцінки ступеня мозаїцизму ми можемо перенести мозаїчний ембріон.

Наші спеціалісти

Лялюк Василь Васильович

Завідувач відділенням ембріології

Омельченко Марина Ігорівна

Ембріолог

Ціни

Найменування Вартість, грн.
ICSI (до 10 яйцеклітин) 7 700
Культивування ембріонів 6 500
Допоміжний хетчінг 3 500
Трофектодермальна біопсія 3 370
Замороження (вітрифікація) ембріонів з урахуванням вартості 1 кріотеку 4 180
Додатковий кріотек 855
Кріозберігання ембріонів 1 місяць 335
Кріозберігання ембріонів 3 місяці 855
Кріозберігання ембріонів 6 місяців 1 508
Кріозберігання ембріонів 12 месяців 2 620
Спермограма 420

Статті про ембріологію

Чому перенос ембріона краще робити саме на 5-й день розвитку?

Сьогодні Василь Васильович Лялюк, ембріолог медичного центру Reprolife, розповість про плюси та мінуси переносу ембріона на всіх етапах його розвитку.

Що впливає на якість ооцитів?

При складнощах із зачаттям малюка жінок часто цікавить питання, що впливає на якість яйцеклітин? Як підвищити свої шанси на зачаття? Дійсно, якість статевих клітин - найважливіший фактор для успішної вагітності. Розповідає Романова Ольга Олегівна, головний лікар клініки.

Чому не всі яйцеклітини запліднюються?

Під час лікування за допомогою допоміжних репродуктивних технологій яйцеклітини і сперматозоїди необхідно об'єднати в ембріолабораторії одним з двох методів: звичайним екстракорпоральним заплідненням (ЕКЗ, IVF) або інтрацитоплазматичною ін'єкцією сперматозоїдів (ІКСІ, ICSI).